E ovako... Moje znanje iz optike je vrlo slabo, stavise ogranicava se na prelamanju i odbijanju svetlosti. Moze li neko da mi objasni sta to nas u stvari sprecava da kroz mikroskop vidimo atom ili da kroz teleskop vidimo stvari jos udaljenije od onih koje smo do sada videli? Unapred hvala
Ostaviću astronomima da ti odgovore na pitanje u vezi teleskopa (gde su limiti često definisani brojem fotona koji dolaze iz datog izvora, pogotovo relativno na druge bliske izvore; osetljivost detektora igra glavnu ulogu).
Kod mikroskopa, u većini slučajeva se radi o ograničenom kvalitetu sočiva; ali kod najboljih sočiva, konačno ograničenje daje difrakcija svetlosti. Matematika je suviše komplikovana za iznošenje ovde, ali stvar se svodi na činjenicu da je svetlost talas.
Možda se secas osnovnih eksperimenata iz fizike u kojima se svetlost pušta kroz tanak prorez, što sa druge strane proizvodi difrakciju:
Otvor kamere (aperture, ne znam koji je izraz na srpskom) se ponaša kao jedan takav prorez i proizvodi odredjenu količinu difrakcije. Ovo postavlja konačno ograničenje na veličinu objekata koji se mogu razlikovati (rezoluciju), koja zavisi od veličine aperture i talasne dužine svetlosti. Teorijski limit je jedna četvrtina talasne dužine svetlosti, ali praktični zahtevi mikroskopa dodaju još malo na to, što dovodi do konačnog limita običnih mikroskopa od oko 200 nanometara.
Ali ovaj problem se može donekle zaobići. Ako ti nije potrebno da posmatraš žive ćelije, možeš da ih zamrzneš ili prekriješ metalnim slojem, i da onda posmatraš mnogo finije detalje pomoću elektronskog mikroskopa.
Šta ako želiš da gledaš živu ćeliju? I tu se limit može smanjiti do skoro molekularnog. Recimo, meni je neophodno da mogu da pratim pojedinačne mitohondrije u aksonima nerava, što je značajno ispod 200nm limita. Rešenje je konfokalni mikroskop, plus fluorescencija. Prvo, šta je konfokalni mikroskop?
Kod običnog mikroskopa, ako fokusiras sočivo kroz tkivo, vidiš jasno neke strukture - one koje su u fokusu - dok su ostale strukture (van fokusa) mutne. Problem je u tome što strukture van fokusa ali izmedju fokusa i sočiva zamućuju ono što želiš da vidiš.
Konfokalni mikroskop ima sočivo koje se nalazi iza rupice koja blokira talase svetlosti koji dolaze van fokusa. Otud,
sve što je van fokusa je nevidljivo (crno). Ovo značajno povećava rezoluciju samo po sebi. Ograničenje, međutim, je što se eliminiše veliki deo svetlosti i što se ne može osvetliti ceo uzorak: svetlost mora da bude veoma snažna i da pada samo na jednu fokusiranu tačku. Otud, konfokalni mikroskopi zahtevaju lasersku svetlost, a detekcijija zahteva fotomultiplikaciju ili mehaničku detekciju. Drugim rečima, ne možeš da gledaš očima kroz konfokalni mikroskop - slika se pojavljuje na ekranu.
Ovo i dalje nije, samo po sebi, dovoljno za moderne naučne svrhe. Dodatna rezolucija se može dobiti tako što se eliminiše sva ulazna svetlost. Ali kako onda videti bilo šta?
Recimo, u mom slučaju (da se razumemo, ovo nije moje otkriće, već standardna stvar u mnogim naučnim granama danas) napravio sam genetski konstrukt koji se sastoji od kontrolnih mehanizama iz ćelija gljivica, signala uzetih iz ljudske genetike, i gena iskopiranog iz jedne vrste meduza. Ovaj konstrukt sam onda ubacio u genom voćnih mušica.
Rezultat su mušice koje proizvode meduzin protein samo i jedino u svojim nervnim ćelijama, i koje taj protein pakuju isključivo u mitohondrije. Ovaj protein, zvan GFP, iliti "green fluorescent protein" (zeleni fluorescentni protein) kod meduza služi da proizvede svetlost (ako si video filmove u kojima meduze blago svetlucaju, to je to).
Ali on ima još jednu dodatnu osobinu: ako osvetliš protein talasom plave svetlosti, on ga upije, jedan deo energije prebaci u vibracije, a ostatak oslobodi nazad u vidu fotona zelene svetlosti. Znači, ako usmerim plavi laser na mušice,
mitohondrije u nervima tih mušica će da svetle nazad zelenom bojom. Ako onda ispred sočiva stavim filter koji eliminiše plavu svetlost, dobijam dodatno besplatno fokusiranje - pošto je jedini izvor svetlosti tada ona svetlost koja dolazi iz moje mete.
Ako nije jasno, evo jedne nesavršene analogije. Zamisli da pokušavaš da sa jedne planine usred noći nađeš čoveka koji se nalazi na susednoj planini. Možeš da upališ neki snažan reflektor i da onda polako ideš po planini i gledaš kroz dvogled i da tražiš gde se on nalazi. Ili možeš da prosto isključiš reflektor, i da gledaš kroz dvogled kada taj čovek upali šibicu. Mnogo manja svetlost daje mnogo veću vidljivost.
Ovim se mikroskopija može spustiti do nekoliko desetina nanometara rezolucije.
Ali atomi još nisu vidljivi. Šta sa njima?
Možemo videti i njih, ali tu su potrebne mnogo komplikovanije stvari. Teorijski, mogao bi da ih "vidiš" pomoću Rendgenskog zračenja: ono ima toliko malu talasnu dužinu, da je jedna četvrtina dužine dovoljno mala da se vide pojedinačni atomi. Problem je u tome što rendgensko zračenje ne može da se fokusira.
Znači, imaš dobru svetlost, ali nemaš nikakav mikroskop. Kako to možeš da iskoristiš?
Za sada, možemo da vidimo atome samo u veoma čistim supstancama, koje možemo da kristalizujemo. U kristalima, svi molekuli su raspoređeni u uređenu strukturu, što omogućava upotrebu Bragovog zakona. Ovde je u pitanju dosta komplikovana matematika, opet (koliko komplikovana? osnovna jednačina je trostruki integral nad funkcijom koja sadrži imaginarne brojeve u eksponentu; nije kvantna fizika, ali nije baš za objašnjavanje na forumu).
Ali ukratko, ako kristal neke supstance izložiš veoma jakom rendgenskom zračenju (ovde se obično koriste sinhrotroni, mašine sa prečnikom od više stotina metara, gde se čestice ubrzavaju kroz snažna magnetna polja i onda udaraju o metalne mete, proizvodeći radijaciju), dobićeš difrakciju:
Ako onda kristal polako okrećeš u istoj ravni, dobićeš niz ovakvih difrakcija, koje stvaraju trodimenzionalnu mapu "odjeka". Iz ove mape se može izračunati trodimenzionalna mapa elektrona, koja izgleda otprilike ovako:
Ako znaš atomski sastav jedinjenja, možeš da vidiš kako se on uklapa u ovu mapu, i da rekonstruišeš čitav molekul. Tako se dobijaju molekularne strukture proteina, u kojima znamo kako dati protein izgleda u stvarnosti (tj. gde se njegovi atomi nalaze). Recimo, evo ti slika molekula proteina rodopsina (koji je osnova za naše čulo vida), prikazana na različite načine:
(A.Struktura rodopsina.B.Hemijska struktura rodopsina.C.Atomski pogled na rodopsin.D.Molekularna površina rodopsina.)
Postoje i drugi načini da se "vide" pojedinačni atomi (nuklearna magnetna rezonanca, npr.), ali mislim da je ovo dovoljno komplikovano za jednu poruku.